張力群   謝娟^※  蔡昌化^Δ

 

摘  要

目的 在篩選抗急慢性肝炎的新藥動物實驗中，以” 當飛利肝寧膠囊”為對照藥，觀察其抗炎，退黃的機理。方法采用經(jīng)典的大鼠足跖注射角叉菜膠所至炎性腫脹，大鼠皮下棉球肉芽腫增生，大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出，二甲苯所至小鼠耳廓腫脹及耳毛細血管通透性增高，小鼠腹腔毛細血管通透性增加進行抗炎，抗?jié)B出實驗。ANZT大白鼠黃疸肝炎模型觀察了”當飛利肝寧膠囊”清熱解毒，活血化瘀的抗肝炎退黃效果。結(jié)果  “當飛利肝寧膠囊”對大鼠足跖注射角叉菜膠引起的炎性腫脹有明顯抑制作用（P<0.001），對大鼠棉球肉芽腫的形成有顯著的抑制作用（P<0.01），可使大鼠CMC囊中白細胞游出明顯減少（P<0.001），明顯抑制二甲苯所至耳廓腫脹的作用（P<0.05）及耳毛細血管通透性增高（P<0.001），明顯抑制醋酸所至小鼠腹腔毛細血管通透性增加（P<0.05），對ANZT致大鼠黃疸肝炎的退黃效果（P<0.01）。結(jié)論 “當飛利肝寧膠囊”對急性炎癥具有抗炎作用，可能對炎癥的多個環(huán)節(jié)如體內(nèi)的炎性介質(zhì)釋放，毛細血管通透性的增加，組織水腫脹及炎性滲出，以及炎癥增殖期的肉芽組織增生均有抑制作用。對ANZT致大鼠黃疸肝炎的退黃效果表明： “當飛利肝寧膠囊”具有清熱解毒和活血化瘀的雙重藥效。清熱解毒是中醫(yī)治療急性感染性疾病的主要治法，由于感染，特別是局部感染發(fā)展到一定階段常伴有血瘀證候。此時配伍活血化瘀法，?？纱鬄樘岣忒熜?。這為當飛利肝寧膠囊用于慢性肝炎抗纖維化臨床提供了藥理依據(jù)。

主題詞  抗炎癥滲出  黃疸性肝炎  清熱解毒  活血化瘀  “當飛利肝寧膠囊”

雙重藥效

四川美大康藥業(yè)股份有限公司的當飛利肝寧膠囊以當藥及水飛薊為有效成分，有減輕肝細胞變性、抑制肝細胞炎癥，穩(wěn)定肝細胞膜的作用；在臨床上表現(xiàn)為溫和、平穩(wěn)降低轉(zhuǎn)氨酶且不易反彈的特點。鑒于水飛薊降酶抗肝炎的效果早有定論，而抗慢性肝纖維化的效果與藥物中有效成分及抗炎退黃效果有關。我們在篩選抗黃疸性肝炎藥時，以“當飛利肝寧膠囊”為對照藥進行實驗，現(xiàn)將有關該藥抗炎，退黃的觀察結(jié)果報告如下。

1 材料

1.1動物：昆明種小鼠，ICR小鼠，wistdv大鼠，SD大鼠均由云南省實驗動物中心提供。

1.2藥物與試劑：“當飛利肝寧膠囊”、 實驗前以蒸餾水配制成不同濃度的溶液，最后選定相當于臨床用量50倍的劑量進行實驗。a一萘異硫氟酸酯（ANZT）用其麻油溶液。其它藥物試劑配制方法略。

2 方法與結(jié)果

2.1抗炎作用

2.1.1 對大鼠足跖注射角叉菜膠所致炎性腫脹的影響：取體重160克——180克雄性大鼠30只，隨機分成3組，每組10只，分別為空白對照組，“當飛利肝寧膠囊”組和布洛芬陽性對照組，均OP給藥。給藥后1h，大鼠右后跖sc1%角叉菜0.1ml致炎。用大鼠足爪容積測定儀測定致炎前后不同時間大鼠足爪容積變化，每小時1次，連續(xù)5次。以致炎前后足爪容積的差值作為腫脹度。結(jié)果表明，“當飛利肝寧膠囊”20mg/kg，對大鼠足跖注射角叉菜膠引起的炎性腫脹均有明顯抑制作用，與空白對照組比較有顯著差異（P<0.001）。見表1

 

表1   對大鼠足跖注射角叉菜膠所致炎性腫脹的影響

劑量	動物數(shù)	致炎后不同時間腫脹度（ml,x±SD）
藥物	（mg/kg ）	（只） 1h		2h		3h		4h
生理鹽水	10.0	10	0.38±0.10		0.49±0.21		0.51±0.20		0.48±0.16
當飛利肝寧膠囊	20.0	10	0.05±0.04***		0.08±0.07***		0.25±0.22*		0.37±0.10
布洛芬	0.1(g)	10	0.10±0.06***		0.16±0.06***		0.24±0.08**		0.28±0.09**

t檢驗 與生理水比較，^*P<0.05，^**P<0.001，^***P<0.001。

2.1.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響：取Vvistar種大鼠30只，雌雄各半，體重160g±20g，分組及劑量同上。將動物i.p戌巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉后，仰臥固定于鼠板上，在無菌操作下，下腹部稍加剝離皮下組織，用眼科鑷將20mg重滅菌棉球2只植入腹部皮下，隨即縫合皮膚。術后次日灌胃給藥一次，連續(xù)用藥7d。經(jīng)8天動物脫頸椎致死后，打開切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起剝出，剔除脂肪組織，置60℃烘干，稱重，將所得肉芽腫重量減去棉球重量，即肉芽腫凈重。計算每組動物肉芽腫毫克重/每百克體重均數(shù)和標準差，比較各組肉芽腫重量，計算抑制率，結(jié)果20mg/kg“當飛利肝寧膠囊”組對大鼠棉球肉芽腫的形成有顯著的抑制作用，（P<0.01）見表2。

表2對大鼠棉球肉芽腫的影響（X±SD）

組	劑   量	例數(shù)	肉芽總重	抑制率
別	（mg/kg）	(N)	mg/100g體重	（%）
對照組	10.0	10	60.92±15.73
當飛利肝寧膠囊	20.0	10	38.45±14.74**	40.74
百蕊片	0.24（g）	10	29.72±6.81**	52.97

與對照組相比：** P<0.01

 

2.1.3對大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出的影響：SD大鼠30只，雌雄各半，體重160g—180g，隨機分成3組，每組10只。組別設置同上，均op給藥2次，間隔4h，于給藥前一天在無菌操作下向大鼠背部皮下注射入空氣5mI，形成一園形氣囊，給藥后1h用消毒針頭和注射器向囊內(nèi)注入1.5%CMC液5mI，于首次給藥后3h及7h吸取囊內(nèi)CMC液0.1m1，精確吸取0.01m1，稀釋劑0.5m1，滴于白細胞計數(shù)板上，計算白細胞數(shù)。結(jié)果20mg/kg“當飛利肝寧膠囊”組可使CMC囊中白細胞游出明顯減少，與空白對照組比較有顯著差異（P <0.01）見表3。

表3對大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出的影響

 

藥           劑 量        動物數(shù)    囊內(nèi)白細胞數(shù)（10/Lx±SD）

　　　（mg/kg）     （只）

物                               3h              7h

生理鹽水      5.0      10         8.0±1.1         58.8±13.4

　　當飛利肝寧膠囊 　20.0     10         3.3±2.0*       19.8±2.3*

布 洛 芬    0.1（g） 10         2.7±1.2*       13.2±6.4*

 

七檢驗  與生理鹽水比較：P<0.001

2.1.4 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響：取昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重18g—22g，隨機分成3組，每組10只。連續(xù)給藥5d，末次給藥1h后，每只小鼠左耳涂0.05 mI二甲苯致腫，右耳作正常對照，1h后處死小鼠，以左耳重量減去右耳重量為腫脹度，比較藥物的抗炎作用，結(jié)果20mg/kg”當飛利肝寧膠囊”具有明顯的抑制二甲苯所致耳廓腫脹的作用，與對照組相比，有顯著性差異（P<0.05），見表4

表4  對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（x±SD）

 

組   別      劑   量       例  數(shù)      腫 脹 率        抑  制  率

             （g/kg）        (N)         （%）            （%）

對 照 組      0.5 mI         10         0.88±0.47  

當飛利肝寧膠囊 20.0          10         0.53±0.23^*          40.72

百 蕊 片      0.24          10         0.50±0.24^*          44.21

與對照組相比：*P<0.05

2.1.5 對二甲苯所致小鼠耳毛細血管通透性增高的影響：取雄性小鼠30只，體重26g—30g隨機分成3組，每組10只，分組及給藥同上。給藥后1h，小鼠經(jīng)尾靜脈注入0.5%伊文思藍生理鹽水0.1ml/10g并迅速將0.04mI二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面。20min后將小鼠處死，剪下右耳，用直徑9mm的打孔器于各耳相同部位打下園形耳片。剪碎耳片置于10.0mI丙酮一生理鹽水（7：3）提取液的有塞試管中，暗處放置，每日輕搖試管2-3次，3d后經(jīng)110X g離心10min，取上清液于590nm處測吸光度。以未泡皮膚之丙酮一生理鹽水提取液校零。從標準曲線上求得各耳片染料量。結(jié)果表明：20mg/kg當飛利肝寧膠囊組能明顯抑制二甲苯致小鼠耳毛細管通透性增高，與空白對照組比較有顯著差異（P<0.001）見表5。

 

表5對二甲苯致小鼠耳毛細血管通透性增高的影響

組          劑   量      動物數(shù)              耳片染料量

別          （ml/kg）       (只)               (M ·x±SD)

生理鹽水         20.0         10                    16.5±3.1

當飛利肝寧膠囊 　20.0(mg)         10                    6.8 ±2.0*

布 洛 芬         0.1（g）     10                    4.8±2.3*

與對照組相比：*P<0.05

2.1.6 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響：分組及劑量同上。給藥1h后，給各鼠iv0.5%伊文氏藍10ml/kg。注射后20min脫頸椎處死小鼠，以6ml生理鹽水分數(shù)次洗滌腹腔，吸管吸出洗液，合并加生理鹽水至10ml，離心15min，取上清液用724-IP分光光度計（a=590nm）測定光密度A值。結(jié)果顯示：20mg/kg當飛利肝寧膠囊組明顯抑制醋酸腹腔注射后所致的毛細血管通透性的增加，與對照組相比，具有顯著的差異性，（P<0.05）見表6。

表6對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響（x±SD）

 

組   別         劑    量        例   數(shù)          光 密 度

（mg/kg）         （N）             A值

對 照 組                              10            0.321±0.091

當飛利肝寧膠囊 　　　　20.0             10             0.232±0.088^*

百 蕊 片             0.24（g）        10            0.277±0.087^*

與對照組相比： *P<0.05  

2.2 退黃作用

2.2.1 Wistar大白鼠，體重180g—220g，雌雄不拘，隨機分為生理鹽水對照組，ANZT中毒組，當飛利肝寧膠囊治療組。ANZT中毒組和當飛利肝寧膠囊治療組均先將75mg/kg的ANZT分別灌入大鼠胃內(nèi)，由于大鼠經(jīng)ANZT中毒后6小時肝細胞開始變性壞死，故選定12小時開始治療用當飛利肝寧膠囊20mg/kg，ig，bid，連續(xù)給藥3天。而ANZT中毒組和生理鹽水對照組則補給等體積的生理鹽水。3組均于中毒72小時后一起經(jīng)股動脈切開放血，收集血樣于室溫下靜置4—6小時分離血清，用咖啡因法定量測定SB，見表7。

表7血清膽紅素含量的比較

組   別           動物數(shù)                    SB(mg%血清)

                  （只）                      x±SD

生理鹽水組          10                       0.46±0.29

ANZT組             10                       5.34±1.05        

當飛利肝寧膠囊組            10                       3.43±1.54*    

 

*P<0.01  

結(jié)果表明，當飛利肝寧膠囊治療組的血清膽紅素顯著低于ANZT中毒組（P<0.01）。治療后，血清膽紅素的含量由5.34mg降至3.43mg，平均下降36.2%。

3討論

實驗結(jié)果表明，”當飛利肝寧膠囊“對急性炎癥具有抗炎作用，它能明顯抑制由角叉菜膠所致的大鼠足跖炎性腫脹，也能明顯抑制二甲苯致小鼠毛細血管通透性增高及大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出。 這三項抗炎作用為該藥用于治療急性炎癥提供了藥理學依據(jù)。

實驗還發(fā)現(xiàn)，“當飛利肝寧膠囊”可明顯抑制二甲苯所致耳廓腫脹作用，抑制大鼠棉球肉芽腫脹和醋酸腹腔注射后所致毛細血管通透性的增加。表明其對急慢性炎癥反應均有顯著抑制能力，并有效抑制炎癥階段毛細血管的通透性，減輕滲出反應。提示“當飛利肝寧膠囊”可能對炎癥的多個環(huán)節(jié)如體內(nèi)的炎性介質(zhì)釋放，毛細血管通透性的增加，組織水腫脹，炎性滲出，以及炎癥增殖期的肉芽組織增生等均有抑制作用。

“當飛利肝寧膠囊”退黃實驗結(jié)果表明其顯著降低血清總膽紅素的含量，可能與其改善大鼠肝臟微循環(huán)，促進肝細脆的再生與恢復有關。

很多中醫(yī)文獻及臨床觀察均指出活血化瘀可增強清熱解毒的治療效果。但兩者功效均具備的中成藥不多，本實驗結(jié)果表明“當飛利肝寧膠囊”的這兩種功效在臨床應用中的廣泛的有效價值。

 

 

參考文獻略

 

第一作者，張力群（云南省藥物研究所藥理室）高級工程師。

通訊地址：昆明市科醫(yī)路康宏小區(qū)39棟2單元402號（郵編：650106）